Бурное развитие техники получения и длительного поддержания активности клеточных культур обеспечило возможность создания стандартных клеточных систем, позволяющих in vitro оценить качество различных био- и химиопрепаратов. Отсутствие токсичности является одним из основных критериев выбора инъекционного материала.

      В настоящей работе представлены результаты оценки влияния различных гелевых имплантатов (ПМГ «Интерфалл», ПААГ «Формакрил», «Рестилайн», силиконовый гель) на характеристику клеточной линии Л-41 КД/84, отличающуюся выраженной стабильностью своих культуральных свойств (Н. П. Глинских, 1987). Гели "Интерфалл", "Формакрил" и "Рестилайн" находились в стандартной фабричной упаковке, а силиконовый гель был взят из протеза для молочной железы (производство г. Москва), изучение воздействия которого на клеточные культуры, возможно, откроет новые стороны этого геля для производителя.

Материалы и методы

      Испытанию были подвергнуты ПААГ «Интерфалл», ПААГ «Формакрил», «Рестилайн» и силиконовый гель. Все гели были проверены на стерильность. Проверка осуществлялась следующим образом: поверхностные кусочки гелей были помещены в жидкую тиогликолевую среду с последующей инкубацией при +36°С в течение 3-х дней и при комнатной температуре в течение 7 дней. Гель вносили в среду в стерильных условиях в количестве 10% от объема. Изменения рН среды при этом не происходило, что свидетельствует о нейтральной реакции геля и его малой растворимости.

      Клетки Л-41 КД/84 культивировали на смеси сред 199 и Игла (1:1) с добавлением 10%-ной сыворотки молодняка крупного рогатого скота без антибиотиков. Доза посадки - 60 тыс. кл/мл. После 5-7 пассажей с добавлением 10% гелей, осуществляемых с интервалом 7 дней, проводили оценку качества культур клеток.

      Схема эксперимента была следующей. В пенициллиновые флаконы вносили по 1 мл взвеси клеток в концентрации 120 тыс. кл/мл и инкубировали их в течение 2 часов при температуре +37°С, чтобы обеспечить прикрепление клеток к стеклу. К прикрепившимся клеткам добавляли по 1 мл суспензии геля в среде культивирования. Через 24, 48, 72, 96 часов от начала эксперимента определяли плотность популяции клеток. Для этого гель отмывали физраствором, клетки снимали со стекла по общепринятой методике и ресуспендировали в стандартном объеме среды, окрашивали с помощью витального красителя и подсчитывали число клеток с помощью камеры Горяева (Н. П. Глинских, Р. Я. Подчерняева и др. 1990 г.).

      В дальнейшем осуществляли морфологическое исследование клеток, культивировавшихся в среде, содержащей гель. Клетки выращивали во флаконах с предметными стеклами. Через 24, 48, 72 и 96 часов стекла с клетками в стерильных условиях доставали из флаконов, отмывали в физиологическом растворе и фиксировали 70%-ным этанолом. Окраску клеток на стеклах проводили гема-токсилином и эозином по стандартной методике.

      Во всех вариантах опытов оценивали митотическую активность, аномалии митозов и интерфазных клеток, количество некротизированных элементов в культуре (С. Г. Курумчина, 1981 г.).

Результаты и обсуждение.

       Изменения пролиферативной активности клеточных культур относительно контроля оценивали с учетом времени экспозиции и вида геля на фоне контроля.

      Из представленных данных выявлено, что плотные и средней плотности гели не вызывают достоверных снижений пролиферативной активности клеток даже в первые сутки роста, что позволяет говорить об их нетоксичности для клеточной культуры.

Продолжение следует…

Н.П. Глинских, В.А. Виссарионов, Е.И. Бурыгина, Е.И. Карпова, А.А. Бахарев, О.Ю. Гоголева, И.В. Устьянцев, Институт пластической хирургии и косметологии МЗ РФ, Москва, Екатеринбургский НИИ вирусных инфекций.

Комментарии : 0

    Оставить комментарий

    Отменить